El objetivo fue desarrollar y caracterizar in vitro Bartonella bacilliformis mutantes resistentes a los antibióticos. Tres cepas de B. bacilliformis se sembraron 35 o 40 veces con azitromicina, cloranfenicol, ciprofloxacina o discos rifampicina. Resistencia-estabilidad se evaluó con la realización de 5 pasos en serie sin presión antibiótica. La CIMs se determinaron con / sin Phe-Arg-β-Napthylamide y artesunato. Alteraciones diana se proyectarán en el23S rRNA , rpld , rplV , gyrA , gyrB , parC parE y RpoB genes. Resistencia al Cloranfenicol y a la ciprofloxacina fueron los más difíciles y más fáciles (> 37,3 y 10,6 pasajes) para ser seleccionados, respectivamente. Todos los mutantes, pero uno seleccionados con cloranfenicol alcanzan niveles altos de resistencia. Todo rifampicina, una azitromicina y uno mutantes ciprofloxacina no totalmente revierten cuando se cultivan sin presión antibiótica. Resistencia a la azitromicina estaba relacionado con L4 sustituciones de Gln-66 → Lys o Gly-70 → Arg; L4 eliminación Δ 62-65 (Lys-Met-Tyr-Lys) o L22 de inserción 83 :: Val-Ser-Glu-Ala-His-Val-Gly-Lys-Ser; en dos mutantes resistentes al cloranfenicol el 23S rRNA se detectó G2372A mutación. GyrA Ala-91 → Val y Asp-95 → Gly y GyrB Glu474 → Lys se detectaron en los mutantes resistentes a ciprofloxacina. RpoB sustituciones de Gln-527 → Arg, His-540 → Tyr y Ser-545 → Phe además de Ser-588 → Tyr se detectaron en los mutantes resistentes a rifampicina. En 5 mutantes se observó el efecto de las bombas de eflujo de resistencia. La resistencia a los antibióticos se debió principalmente a orientar las mutaciones y la sobreexpresión de bombas de salida, lo que podría ser la base de fracasos microbiológicos durante los tratamientos.
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10/02/2016
Desarrollo y caracterización de antibióticos altamente resistentes Bartonella bacilliformis mutantes
- Cláudia Gomes
- , Sandra Martínez-Puchol
- , Lidia Ruiz-Roldán
- , María J. Pons
- , Juana del Valle Mendoza
- y Joaquim Ruiz
El objetivo fue desarrollar y caracterizar in vitro Bartonella bacilliformis mutantes resistentes a los antibióticos. Tres cepas de B. bacilliformis se sembraron 35 o 40 veces con azitromicina, cloranfenicol, ciprofloxacina o discos rifampicina. Resistencia-estabilidad se evaluó con la realización de 5 pasos en serie sin presión antibiótica. La CIMs se determinaron con / sin Phe-Arg-β-Napthylamide y artesunato. Alteraciones diana se proyectarán en el23S rRNA , rpld , rplV , gyrA , gyrB , parC parE y RpoB genes. Resistencia al Cloranfenicol y a la ciprofloxacina fueron los más difíciles y más fáciles (> 37,3 y 10,6 pasajes) para ser seleccionados, respectivamente. Todos los mutantes, pero uno seleccionados con cloranfenicol alcanzan niveles altos de resistencia. Todo rifampicina, una azitromicina y uno mutantes ciprofloxacina no totalmente revierten cuando se cultivan sin presión antibiótica. Resistencia a la azitromicina estaba relacionado con L4 sustituciones de Gln-66 → Lys o Gly-70 → Arg; L4 eliminación Δ 62-65 (Lys-Met-Tyr-Lys) o L22 de inserción 83 :: Val-Ser-Glu-Ala-His-Val-Gly-Lys-Ser; en dos mutantes resistentes al cloranfenicol el 23S rRNA se detectó G2372A mutación. GyrA Ala-91 → Val y Asp-95 → Gly y GyrB Glu474 → Lys se detectaron en los mutantes resistentes a ciprofloxacina. RpoB sustituciones de Gln-527 → Arg, His-540 → Tyr y Ser-545 → Phe además de Ser-588 → Tyr se detectaron en los mutantes resistentes a rifampicina. En 5 mutantes se observó el efecto de las bombas de eflujo de resistencia. La resistencia a los antibióticos se debió principalmente a orientar las mutaciones y la sobreexpresión de bombas de salida, lo que podría ser la base de fracasos microbiológicos durante los tratamientos.
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